出版日期:2005年5月
前言
生物化学是现代生命科学中发展迅速的学科，其实验技术的创新发展与技术应用的快捷，使生物化学成为现代生物工程中不可缺少的基础学科。相对于理论教学，生物化学的实验教学作为生物化学教学的重要组成部分，更具直观性、实践性、创新性和综合性，成为生物化学学科的一种有效的教学手段。生物化学实验教学的宗旨是让学生掌握生物化学的基本实验方法和技能，培养学生观察问题、分析问题及解决问题的能力和严谨、务实的科学作风，为学生日后在工作中运用相关知识奠定坚实的基础。
本教材涵盖了现代生物化学研究中常用的方法和技术。从20世纪80年代初，我们为本科生开设了生物化学实验并编写相应的实验讲义。本教材是在多年的生物化学与生物技术实验课程积累的经验及历年的实验讲义（特别是“新编生物化学实验”讲义）的基础上，对实验内容进行整理、修改、汇编而成。
生物化学实验的基本技术包括色谱技术、电泳技术、离心技术、分光技术等，本教材介绍了这些常用实验技术的基本原理和实验方法。教材基本内容涉及生物大分子的理化性质及生物学活性的鉴定，生物大分子的分离、提取和纯化等基本技术方法的实验原理与操作方法，以及一些实验仪器与设备的介绍。开设的实验包括生物化学基础实验、生物化学大实验和一些综合性实验。
《
生物化学实验技术》教材旨在帮助学生学习生物化学的基本实验方法的原理，掌握生物化学的基本技能，学会相关仪器设备的操作，在培养学生动手能力的同时，提高学生的科学的思维能力、创新意识、合作精神、解决问题的能力，从而培养学生从事科学研究和技术工作的基本素质。通过实验教学，拓宽学生的知识领域，培养和提高实践能力。
《生物化学实验技术》可作为高等院校生物相关专业的生物化学实验课教材，也可作为从事生物技术研究与教学的科技人员和教育工作者的参考用书。
本教材在编写过程中得到了华东理工大学应用生物学系欧阳立明、常雅宁、宋聿文、沃袅平、俞花等老师的支持和帮助，在此表示感谢。
同时对选用的参考文献及有关材料的作者表示感谢。
由于编者水平有限，书中若有错漏之处，恳请读者批评指正。
生物化学实验技术目录
目录
第一部分生物化学实验的基本知识
第一章生物化学实验基本操作与要求1
第一节实验室规则与安全1
第二节实验室一般事故的处理方法3
第三节玻璃仪器的清洗和干燥4
第四节洗涤液的种类6
第五节常用容量仪器的使用8
第六节试剂的分级、配制及保存16
第七节实验误差与提高实验准确性的方法27
第八节实验记录与实验报告31
第二部分生物化学实验的基本技术
第二章实验样品的制备34
第一节实验样品的采集34
第二节生物物质的提取37
第三章沉淀技术40
第一节盐析法41
第二节有机溶剂沉淀法43
第三节等电点沉淀45
第四节选择性变性沉淀46
第四章色谱技术47
第一节吸附色谱49
第二节凝胶色谱56
第三节离子交换色谱67
第四节亲和色谱73
第五章电泳技术77
第一节电泳基本原理77
第二节醋酸纤维素薄膜电泳81
第三节琼脂糖凝胶电泳82
第四节聚丙烯酰胺凝胶电泳84
第五节SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳89
第六节等电聚焦电泳91
第六章离心技术94
第一节基本原理94
第二节离心分离方法99
第三节离心机和转子的种类101
第七章固定化技术103
第一节固定化酶103
第二节固定化细胞106
第八章免疫化学技术108
第一节免疫学基本概念108
第二节抗血清的制备109
第三节抗体的检测111
第九章分光光度法116
第一节基本原理116
第二节光吸收的测定方法120
第三节物质的定性定量测定123
第四节提高测量灵敏度和准确度的方法125
第三部分生物化学实验
第十章糖类128
实验一斐林试剂置换法测定还原糖含量128
实验二斐林试剂热滴定法131
实验三斐林试剂比色法135
实验四蒽酮比色法137
实验五3，5二硝基水杨酸比色法138
实验六血糖的测定——FolinWu法140
实验七血糖的测定——邻甲苯胺法142
第十一章脂类146
实验八猪脑脂质的提取及其分离鉴定146
实验九血清总胆固醇的定量测定——磷硫铁试剂法149
实验十血清甘油三酯的测定——抽提法151
实验十一脂肪酸的β氧化154
实验十二辅酶Q10的制备及检测156
实验十三血清胆固醇的定量测定——醋酸酐法159
第十二章蛋白质、氨基酸162
实验十四牛奶中提取酪蛋白162
实验十五总氮量的测定——凯氏定氮法163
实验十六蛋白质浓度测定——紫外吸收法170
实验十七蛋白质浓度测定——双缩脲法172
实验十八蛋白质浓度测定——Folin酚试剂法175
实验十九蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法177
实验二十蛋白质浓度测定——BCA法179
实验二十一甲醛滴定法测定氨基氮180
实验二十二凝胶色谱特性测试183
实验二十三凝胶色谱法测定蛋白质相对分子质量186
实验二十四聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳189
实验二十五SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对
分子质量191
实验二十六离子交换法制备γ氨基丁酸197
实验二十七血清γ球蛋白的分离纯化199
第十三章酶类204
实验二十八酶促反应与时间的关系——初速率时间范围测定204
实验二十九pH值对酶活力的影响——最适pH值的测定207
实验三十温度对酶活力的影响——最适温度的测定209
实验三十一米氏常数（Km）和最大反应速率（Vm）的测定211
实验三十二抑制剂对酶活力的影响——抑制类型的判断和抑制剂
常数（Ki）的测定214
实验三十三氨基酰化酶的测定218
实验三十四凝血酶的提取222
实验三十五酶联免疫吸附测定225
第十四章核酸228
实验三十六酵母核糖核酸的提取及测定228
实验三十七由动物组织中制备DNA230
实验三十八质粒的提取与鉴定233
实验三十九核酸的定量测定——定磷法238
实验四十核酸含量的测定——紫外吸收法241
实验四十一DNA含量测定——二苯胺法243
实验四十二RNA含量测定——地衣酚法244
实验四十三核酸水解及其产物的分离鉴定246
实验四十四离子交换色谱分离核苷酸250
第十五章综合实验255
实验四十五碱性磷酸单酯酶的分离、纯化与鉴定255
实验（一）碱性磷酸单酯酶的提取和活性的测定255
实验（二）离子交换色谱纯化碱性磷酸单酯酶258
实验（三）亲和色谱纯化碱性磷酸单酯酶262
实验（四）免疫双向扩散及免疫电泳法检测264
实验四十六超氧化物歧化酶的分离、纯化266
实验（一）超氧化物歧化酶的活性测定266
实验（二）动物血中超氧化物歧化酶的提取269
实验（三）离子交换法分离纯化超氧化物歧化酶270
实验（四）金属螯合色谱分离纯化超氧化物歧化酶271
实验四十七胰蛋白酶和抑制剂分离、纯化273
实验（一）胰蛋白酶的活性测定273
实验（二）胰蛋白酶的提取276
实验（三）胰蛋白酶的纯化279
实验（四）胰蛋白酶抑制剂的制备——亲和色谱纯化卵黏蛋白285
实验(五)胰蛋白酶抑制剂的制备——亲和色谱纯化抑肽酶287
附录291
参考文献320
本书可作为高等院校生物相关专业的生物化学实验课教材，也可作为从事生物技术研究与教学的科技人员和教育工作者的参考用书。
生物化学实验技术内容介绍:
本书介绍了生物化学实验的基本技术，包括沉淀技术、色谱技术、电泳技术、离心技术、固定化技术、免疫化学技术、分光光度法等基本原理和实验方法。内容涉及生物大分子的理化性质及生物学活性的鉴定，生物大分子的提取、分离和纯化等基本技术方法的实验原理与操作方法，以及一些实验仪器与设备的介绍。开设的实验包括生物化学基础实验，生物化学大实验和一些综合性实验。本书可作为高等院校生物相关专业的生物化学实验课教材，也可作为从事生物技术研究与教学的科技人员和教育工作者的参考用书。
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