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hygao1

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关于分析的一篇好文章 转贴

比较经典。

转自药分网。希望对学分析的有用。

研究生课程《体内药物分析》的教学体会与思考
[发布时间： 2005年11月18日 作者：丁　黎 来源：广　东　药　学　院　学　报 浏览次数： 653]
摘　要　本文从必备的相关学科的基础知识、讲授体内样品前处理和分析方法的建立与评价等章节时应注意的一些问题等方面讨论了研究生课程《体内药物分析》的教学内容以及在教学实践中的经验。
关键词　体内药物分析;教学;实践
　 体内药物分析是由药物分析派生出来的一门研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量的变化规律的新兴学科[ 1 ,2 ] 。随着生命科学的发展,生物医药学及临床药学的兴起,体内药物分析学科在国内亦应运而生,经过二十余年的发展,现已成为药学前沿最活跃的领域之一。近年来虽然许多医药类高校先后面向硕士研究生开设了这一课程,但该课程尚无统一的教材,各校间教学内容、要求及质量参差不齐,现就研究生《体内药物分析》的教学内容及教学过程中一些值得注意的问题谈几点看法与体会。
　　一、介绍相关学科的基础知识
体内药物分析学科的发展的最大推动力无疑来自生物医学领域及新药药代动力学研究领域的巨大要求和分析技术上的飞跃性进步。临床治疗药物监测和制剂生物利用度测定是体内药物分析最初的用武之地。而目前随着药物体内过程的研究工作和药物代谢物分离测定工作逐渐成为新药开发中最重要的基础工作时,体内药物分析学科已与药物代谢动力学和临床药理学互相关联、密不可分。因此学科的发展已对体内药物分析工作者提出了全新的要求,即要求体内药物分析工作者应熟悉药物的体内过程并具有相应的临床药理及药物代谢机理等基础知识,只有这样体内药物分析工作者才能拓宽思路,提高分析问题解决问题的能力,深入开展有关工作。因此我们在体内药物分析课程中增加了一个新的章节“体内药物分析相关的基础理论概述”。在该章节中向学生提供了“药物的体内过程”、“血药浓度与临床效应的关系”、“血药浓度与合理用药”和“治疗药物监测”等必备的基础知识,从而为学生们能更好地理解掌握以后的各章节内容打下了良好的基础。该做法在实际教学过程中收到了良好的教学效果。　　
二、讲授体内样品前处理一章时应注意的问题
　　样品前处理方法有很多,如直接沉淀蛋白法、液-液萃取法、固相萃取法、膜过滤法等,具体处理某一样品时用什么前处理方法最好,到目前为止,没有一本参考书来讨论这一问题,许多体内药物分析授课教师也未重视这一问题,然而这一问题恰恰是许多研究生甚至是药物分析工作者在实验过程中往往把握不好的问题。因此有必要在授课过程中重点讨论这一问题,在讲授这一问题时,应该从样品的种类、样品中待测物的浓度、待测物的稳定性、检测仪器的种类、待测物的检测方式等方面进行综合考虑,举例讨论。如在阿齐霉素制剂生物等效性研究过程中,血样中阿齐霉素的浓度范围为5ng/ ml～1μg/ ml ,其检测方法可采用HPLC 法,LC-MS 法和微生物法等数种方法,若用HPLC 法来检测该样品,由于阿齐霉素的紫外吸收较弱,必须对样品进行富集浓缩,则样品的前处理方法采用液2液萃取法为佳;若用LC-MS 法来检测该样品,则由于LC2MS 仪器的灵敏度足以检测浓度为1ng/ml 以上的样品,故样品的前处理只需采用蛋白沉淀法即可;若用微生物法来检测该样品,则样品连蛋白也不需沉淀,直接上样即可。当然,用LC-MS 法来检测阿齐霉素时,有些分析上作者采用了液-液萃取法,也有另一些分析工作者采用了固相萃取法来处理血样,这些做法虽然行得通,但显然它们不但增加了样品处理的所需时间和工作量,而且增加了样品处理的成本,因此阿齐霉素的血样处理最好采用蛋白沉淀法。蛋白沉淀法中高氯酸沉淀法、甲醇沉淀法、乙腈沉淀法是最常用的方法,但从样品的稳定性角度考虑,阿齐霉素遇酸不稳定,故只能采用甲醇沉淀法或乙腈沉淀法、考虑到乙腈沉淀蛋白效果优于甲醇,且该方法阿齐霉素的回收率较高,故阿齐霉素血浆样品的前处理方法以乙腈沉淀蛋白法为最佳。以上例子不但说明了样品前处理方法选择的重要性,也给出了血样处理方法选择的一条基本思路。
　　三、讲授分析方法的建立与评价一章时应注意的一些问题
　　无论是新药研究中药代动力学参数的求测,还是临床药物的监测等工作,都依赖于体内药物分析提供准确、可靠的体内药物浓度数据。因此,建立可靠的生物样品中微量药物及其代谢物的分析方法至关重要。然而多数相关的体内药物分析参考书由于各种各样的原因,对此章节只是轻描淡写。这种做法不可取。我们在本章内容的教学过程中,从“分析方法的设计依据”、“分析方法建立的一般步骤”、“分析方法验证的内容与要求”三个方面对此项内容进行了详细阐述,并单列一节“体内药物分析方法的应用实例”以帮助学生进一步理解上述三个方面的内容。
在本章内容的教学过程中应结合国家食品药品管理局的新药评审指导原则及国际惯例,对体内药物分析方法的评价指标给出量化范围,如“一般要求准确度RE 在±15 %的范围内,在LOQ 附近应在±20 %的范围内”。此外,应向同学们明确说明“在提取回收率测定过程中,若采用内标法校正,则内标物质应在提取之后、溶剂吹干(如必要) 之前加入,以校正由于提取溶剂的吹干、残渣的复溶以及分析测定等非提取过程造成的待测药物的损失”。以纠正体内分析工作者在提取回收率测定过程中,将内标加入样品后再用有机溶剂提取测定待测药物的提取回收率的常见错误。同时,在该章的教学过程中,应向同学们指出当标准曲线上的高低浓度相差悬殊时,标准曲线应该采用权重回归方法计算,以确保药物浓度较低的样品的测定的准确性,这也是体内药物分析工作者在实际工作容易忽视的问题。
　　四、讲授各种分析技术应重点介绍体内药物分析的前沿技术
　　各种分析技术是体内药物分析工作者依赖以开展工作的技术平台,是构成体内药物分析学科的支柱。它们具有类型的多样性和综合运用的特点,必需能被用以灵敏、专属、高效地解决药物体内诸过程中的复杂问题,其中分离与检测涵盖了工作的整个流程。当前,随着色谱技术的进步,使得各种色谱法,尤其是高效液相色谱法成为主流技术和常规装备被广泛应用,而单纯的光谱法及微生物法由于无分离能力,专属性差,将不断地被色谱法及色谱-光谱联用技术所取代。
然而常规的GC、HPLC 和TLC 技术在本科教学中已重点介绍,因此在研究生教学中不宜再重点讲授,否则会重复乏味。
近年体内药物分析领域中最活跃的前沿技术主要是联用技术,联用技术的发展,尤其是液- 质联用技术(LC-MS、LC-MS-MS) ,它集液相色谱的高分离能力与质谱仪检测的高灵敏度、高专属性于一体,已成为体内药物及其代谢物研究过程中占主导地位的强有力工具之一。其他联用技术(如LC-NMR 等) 的涌现与成熟也将是分析技术发展的必然趋势。
因此应向研究生重点介绍这些前沿技术。


参考文献
[1 ]李好枝主编. 体内药物分析[M] . 北京: 中国医药科技出版社,
2004.
[ 2 ]吴如金主编. 体内药物分析[M] . 北京:人民卫生出版社,1984.

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