双波长是两束不同波长的光,一束测量样品称测定波长(λS);另一束作为对照,称参比波长(λR)。两束光通过斩光器交替照射到样品上,以吸收度之差ΔA定量。双波长可以消除薄层不均匀的影响,使基线变得平稳。测定波长一般选测定组分的最大吸收波长,参比波长可选在组分无吸收的位置,若背景光谱中与λS的等吸收处,可达到排除背景干扰的目的。
而计算中采用比率的方法,即计算两激发波长或两发射波长的荧光强度比,推算浓离。这种比率法不受指示剂的剂量和细胞膜厚度的影响。
可以看一下 一种新的同时测定大鼠心肌细胞内Ca2+和pH的方法,中国医科大学学报,2000 Vol.29 No.1 P.22-24,好像用的就是这种
