报告正文
（一）立项依据与研究内容（4000-8000字）：
1. 项目的立项依据（研究意义、国内外研究现状及分析，附主要参考文献目录。）（基础研究需结合科学研究发展趋势来论述科学意义；应用研究需结合国民经济和社会发展中迫切需要解决的关键科技问题来论述其应用前景。）
恶性肿瘤的高复发率一直是困扰肿瘤医生的难题，越来越多的研究证实肿瘤细胞群体中存在少数能使群体扩增的肿瘤干细胞。它们通常处于慢周期状态，对化疗药物敏感性低，是肿瘤复发的根源。对肿瘤干细胞的研究必然有助于探索恶性肿瘤新的发病机制，并为彻底治愈肿瘤提供可能。
目前对肿瘤干细胞的研究所面临的最大问题是绝大多数的肿瘤干细胞缺乏特异性标记，无法得到分离纯化，从而限制了对肿瘤干细胞的研究。随着对干细胞研究的日益深入，正常成体干细胞的“可塑性”理论越来越被人们所接受，是否肿瘤干细胞也具有类似的“横向分化”能力？我们是否能通过这种“横向分化”能力从极少数几种能分离纯化的肿瘤干细胞（白血病干细胞、乳腺癌干细胞、脑肿瘤干细胞）通过横向分化生成其他类型肿瘤干细胞，从而为广泛地研究肿瘤干细胞的生物学特性提供可能？最近有学者提出了恶性肿瘤的“共同起源”理论。证据如下：（1）来源于骨髓的肝癌干细胞 肝细胞癌可能起源于骨髓来源的前体细胞。胆碱缺陷饮食小鼠在乙基硫氨酸或N-2-AAF处理后可成功诱导肝细胞癌，此种肝癌模型中肝癌起源于骨髓来源的管周干细胞。（2）来源于骨髓的淋巴瘤干细胞 Robert研究发现2例已成功治疗的Burkitt淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病患者几年后发展成淋巴瘤样丘疹病，此患者骨髓虽未累及，但具有与淋巴瘤样丘疹病皮肤损害相同的TCRγ重排，而且骨髓的TCRγ重排在3年前患者的常规检查中已检测到。此外Berg等发现1例大细胞淋巴瘤患者接受T细胞去除的骨髓移植，3年半之后供者和受者均患有皮下脂膜炎样淋巴瘤，遗传学分析发现淋巴瘤来源于供者。上述病例证实骨髓中存在淋巴瘤干细胞，在其归巢至皮肤后发育并进一步分化为淋巴瘤细胞。（3）来源于骨髓的胃癌 Houghton等研究发现幽门螺旋杆菌感染诱导的胃癌小鼠的胃癌细胞来源于骨髓，而不是上皮细胞。示踪实验显示供体小鼠骨髓来源的细胞在胃粘膜占优势，通过化生和发育异常逐渐形成上皮细胞癌。此外，最新研究表明肿瘤细胞也可表达其他系细胞的遗传学标记：（1）通过DNA微序列分析方法检测急性髓系白血病细胞的基因表达发现急性髓系白血病细胞表达122种非造血细胞表达的基因，包括神经组织、肌肉、肝脏和睾丸，而且IL-6或thapsigargin处理白血病细胞可使白血病细胞重新编程，诱导其产生其他非造血细胞的基因。（2）检测一例骨髓移植患者的肝细胞发现肝细胞表达供者造血干细胞的遗传学标记。综上所述，我们得出推论肿瘤干细胞极有可能也具有“横向分化”能力。急性髓系白血病干细胞是目前已知肿瘤干细胞中免疫学表型（CD34+、CD38—、CD71—、HLA-DR—、CD90—、CD117—、CD123+）比较确切的，而肝癌干细胞尚无明确的免疫学标记，研究急性髓系白血病干细胞横向分化为肝癌肝细胞的能力在探索恶性肿瘤新的发病机理的同时为深入研究肿瘤干细胞的生物学特性开辟新的途径。
Piwi家族是干细胞分裂的关键调控因子, 参与核内mRNA 转录后的修饰过程, 与干细胞自我更新的调节相关。Hiwi是来源于人的Piwi 基因家族成员，定位在12 号染色体的长臂，以自调控的方式控制干细胞的分裂和分化。Hiwi 仅表达在骨髓CD34 + 细胞中, 随着CD34 + 细胞的分化,Hiwi 的表达逐渐减少。在骨髓基质或骨髓间充质干细胞中也检测不到Hiwi的表达。Shama等观察到Hiwi 的表达与永生化的白血病细胞KG1 丧失增殖能力有关,过表达则导致KG1的凋亡。Hiwi基因还可能在维持干细胞的静息或下调干/ 祖细胞的细胞周期中发挥作用。最新研究表明Piwi同源物Cniwi可能参与干细胞的横向分化。腔肠动物的横纹肌细胞在体外横向分化为平滑肌细胞时，cniwi表达出现短期上调。近年来有证据表明：过量表达wnt-1基因（类似的干细胞分化基因）的P19 胚胎癌细胞不需要维甲酸的诱导，就可自发地向神经细胞分化。以上资料证明，Hiwi基因极有可能在急性白血病干细胞的横向分化过程中起重要作用。研究肿瘤干细胞中Hiwi的功能对于理解干细胞分化调控的分子机制及干细胞的“重编程”现象将有很大的帮助，并为恶性肿瘤的治疗提供新的靶点。
传统治疗肿瘤的化疗药物均存在耐药问题，尤其是肿瘤干细胞更不敏感。抗癌中药博大精深，高效低毒，从中极有可能筛选出高效杀伤肿瘤干细胞治疗恶性肿瘤的药物。白桦脂酸（Betulinic acid）是从桦树皮中提取的三萜类物质，具有显著的抗肿瘤效应，可诱导黑色素瘤、胃癌、肝癌的凋亡，抑制Lewis肺癌、肉瘤、艾氏腹水癌的增殖。我们的预实验也显示白桦脂酸可显著抑制急性髓系白血病细胞系K562的增殖（IC50值为50μmol/l）。白桦脂酸还可抑制结肠癌、肺癌等癌细胞中NF-κB的激活,而最新研究表明NF-κB可能参与细胞的横向分化，NF-κB激活参与急性单核细胞白血病细胞U937分化为破骨细胞，在神经干细胞分化为星型胶质细胞过程中NF-κB也被激活。因此白桦脂酸有可能通过调节Hiwi的表达来抑制肿瘤干细胞的增殖并影响肿瘤干细胞的横向分化，研究白桦脂酸对肿瘤干细胞的增殖分化的调节作用必然有助于探索恶性肿瘤新的治疗药物。
目前对肿瘤干细胞的研究尚处于初级阶段，而且由于大多数肿瘤干细胞无法分离纯化限制了对它的进一步的研究，本课题利用肿瘤干细胞具有横向分化能力的推论试图通过急性白血病干细胞横向分化来获取目前尚无确切免疫学表型的肝癌干细胞，为肿瘤干细胞的深入研究提供新的途径；研究Hiwi信号在急性白血病干细胞分化和横向分化中的作用，必将探索急性白血病新的发病机制并为白血病的治疗提供新的突破口。以Hiwi信号为靶点研究白桦脂酸治疗急性白血病和肝癌的作用及其机制将为急性白血病和肝癌的治疗发掘新的药物，并为传统中药开拓新的药理作用机制。
参考文献：
1． Robert G. Neoplastic stem cells in cutaneous lymphomas. Arch Dermatol. 2004 140:1156-1160.
2． Houghton J, Stoicov C, Nomura S. Gastric cancer oringinating from bone marrow derived cells. Science 2004 306(5701):1568-71
3． Katja S, Nathalie Y, Volker S. The germ line and somatic stem cell gene Cniwi in the jellyfish Podocoryne carneaInt. J. Dev. Biol. 2004 48: 1-7
4． P Nuciforo and F Fraggetta. Cancer stem cell theory: pathologists’ considerations and ruminations about wasting time and wrong evaluations J Clin pathol 2004 57:782-784
5． Stewart S. Cellular origin of hepatocellular carcinomas. Cell & developmental biology 2002 13:419-424
6． Sharma AK, Nelson MC , Brandt J E , et al. Human CD34( + ) stem cells express the hiwi gene , a human homologue of the Drosophila gene Piwi. Blood , 2001 , 97: 426～434.
7． Gniadecki R, Lukowsky A, Rossen K, et al. Bone marrow precursor of extranodal T-cell lymphoma. Blood 2003 102:3797-3799
8． Lee SM, Nguyen TH, Park MH, et al. EPO receptor-mediated ERK kinase and NF-kappaB activation in erythropoietin-promoted differentiation of astrocytes. Biochem Biophys Res Commun 2004 320(4):1087-95.
9． Amoui M, Suhr SM, Baylink DJ, et al. An osteoclastic protein-tyrosine phosphatase may play a role in differentiation and activity of human monocytic U-937 cell-derived, osteoclast-like cells. Am J Physiol Cell Physiol 2004 287(4):C874-84.
10． Yasunari T and Bharat B Betulinic acid suppresses carcinogen-induced NF-κB activation throrgh inhibition of IκBα kinase and P65 phosphorylation. J Immunol 2003 171:3278-3286
2、项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题。（此部分为重点阐述内容）
研究内容：
① 验证急性白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞的能力
② 明确Hiwi在急性白血病干细胞的分化及横向分化中的作用
③ 明确白桦脂酸对急性白血病干细胞、肝癌干细胞、急性白血病、肝癌细胞增殖、凋亡的影响
④ 明确白桦脂酸对急性白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞的能力的影响
研究目标：
① 确定急性白血病干细胞具有横向分化为肝癌干细胞的能力，探索获得肝癌干细胞的新的途径，为深入研究肝癌干细胞的生物学特性提供可能。
② 研究Hiwi是否参与急性白血病干细胞的分化及横向分化，干扰Hiwi的表达对急性白血病干细胞横向分化能力的影响。
③ 明确白桦脂酸对急性白血病干细胞、肝癌干细胞的增殖分化的影响，寻求针对肿瘤干细胞的理想药物
④ 探讨白桦脂酸是否具有干扰急性白血病干细胞横向分化的能力
⑤ 探讨白桦脂酸是否能影响Hiwi的表达，开拓传统中药新的药理机制
拟解决的关键问题:
① 急性白血病干细胞的最佳培养条件、诱导急性白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞的最优条件
② Hiwi是影响急性白血病干细胞的分化及横向分化的重要信号分子， Hiwi的表达。
③ 白桦脂酸能否抑制急性白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞
3、拟采取的研究方案及可行性分析。（包括有关方法、技术路线、实验手段、关键技术等说明）
拟采取的研究方案：
①用淋巴细胞分离液提取急性髓系白血病患者的骨髓有核细胞，免疫磁珠分选分离高纯度白血病干细胞（CD34+、CD38—、CD71—、HLA-DR—、CD90—、CD117—、CD123+）
②白血病干细胞+高浓度肝细胞生长因子（HGF）+碱性成纤维因子（FGF）培养诱导白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞
③鉴定肝癌干细胞：
1．分别用RT-PCR方法和流式细胞术检测AFP、白蛋白ALB、甲状腺素蛋白（TTR）、CK8/18等mRNA和蛋白水平的表达
2．显微镜下观察有无肝癌细胞形态
3．长期传代培养分化的肝癌干细胞是否具有持续分泌白蛋白的能力
4．自我更新能力的鉴定：长期传代培养肝癌干细胞经门静脉移植到裸鼠，观察肝癌发生几率，检测肝癌组织中癌细胞的形态
⑤ RT-PCR方法和流式细胞术比较白血病干细胞、白血病细胞、肝癌干细胞、肝癌细胞中Hiwi的mRNA和蛋白表达水平
⑥ 比较白血病干细胞+高浓度HGF+ FGF＋Hiwi抗体培养与不加Hiwi抗体培养诱导白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞的能力的变化
⑦ 利用质粒转染技术将Hiwi基因导入，+高浓度HGF+FGF或不加HGF、FGF培养诱导横向分化为肝癌干细胞，比较Hiwi＋/＋和Hiwi-/-白血病干细胞横向分化能力的不同。
⑧ MTT法检测白桦脂酸对白血病干细胞、肝癌干细胞、白血病细胞、肝癌细胞增殖的影响；Tunel法检测白桦脂酸对白血病干细胞、肝癌干细胞、白血病细胞、肝癌细胞凋亡的影响
⑨ RT-PCR和流式细胞术检测白桦脂酸对白血病干细胞、肝癌干细胞、白血病细胞、肝癌细胞Hiwi mRNA及蛋白水平的影响
⑩ 白血病干细胞+高浓度HGF+ FGF＋白桦脂酸培养诱导白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞，与不加白桦脂酸培养体系比较横向分化能力的差异。
可行性分析：
① 我们的预实验也显示白桦脂酸可显著抑制急性髓系白血病细胞系K562的增殖（IC50值为50μmol/l）。
② 本实验所需材料、各种抗体及试剂均可够得。
③ 本实验室拥有所需的实验设备及长期从事相关实验研究的经验。
④ 本课题组主要成员具有丰富的分子生物学理论和实验经验。
4、本项目的特色与创新之处。
① 首次验证了急性白血病干细胞的横向分化能力
② 首次研究了Hiwi在急性白血病干细胞横向分化和分化中的作用
③ 首次研究了中药白桦脂酸治疗急性白血病和肝癌的作用及其机制，开拓传统中药新的作用机制，为传统中药新的临床应用提供新思路
总之，以肿瘤干细胞为切入点研究恶性肿瘤新的发病机理，首次验证了急性白血病干细胞的横向分化能力，内容新，层次深，研究Hiwi在急性白血病干细胞横向分化和分化中的作用为恶性肿瘤的治疗提供新的靶点，从全新的角度阐明传统中药白桦脂酸新的药理作用，具有重要的科学理论价值及广阔的临床应用前景。
本课题的研究设想在国内外未见报道。
5、年度研究计划及预期研究结果。（包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）
（1） 年度研究计划
2006.1--2006.12
免疫磁珠分选分离高纯度骨髓白血病干细胞，诱导白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞
2007.1—2007.6
肝癌干细胞的鉴定
2007.7—2007.12
研究Hiwi在白血病干细胞、肝癌干细胞的表达及其在白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞中的作用
2008.1—2008.10
研究白桦脂酸对急性白血病干细胞增殖、凋亡、横向分化的影响
2008.11-2008.12
总结汇报
（2） 预期研究结果
① 急性白血病干细胞可横向分化为肝癌干细胞
② Hiwi信号参与急性白血病干细胞的分化和横向分化
③ 白桦脂酸可抑制急性白血病干细胞、肝癌干细胞、急性白血病细胞、肝癌细胞Hiwi信号的表达
④ 白桦脂酸可抑制急性白血病干细胞的增殖、促进其凋亡、抑制其横向分化
（二）研究基础与工作条件
1、工作基础（与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩）
本课题组对恶性肿瘤的分子生物学有较深厚的理论及实验基础，课题组成员均熟练掌握分子生物学实验技术，已发表恶性肿瘤的发病机理、基因诊断、临床研究等方面的文章20余篇。参与国家973重点课题子项目《人胚胎生殖脊干细胞的分化与组织干细胞的可塑性研究》中《维持胚胎干细胞不分化分子机理》课题和国家自然基金杰出青年基金课题《白血病干细胞鉴别、基本特征和临床意义》（项目批准号No.30225038）、《调节急性白血病核孔蛋白新型抗肿瘤中药的筛选》（项目批准号30472267）的研究工作，我们的预实验也显示白桦脂酸可显著抑制急性髓系白血病细胞系K562的增殖。
2、工作条件（包括已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径，包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况。）
已具备的实验条件：
1流式细胞仪 2 DNA合成仪
3 定量PCR扩增仪 4定量原位PCR检测仪
5 DNA 测序仪 6超速低温离心机及其他各种细胞离心机
7 各种电泳仪 8 二氧化碳培养箱
9 倒置显微镜 10 荧光显微镜
11 紫外光检测仪 12 超净工作台
拥有细胞培养实验室和分子生物学实验室，并可租用同济医学院卫生部免疫重点实验室，分子生物学开放实验室。
尚缺有关单克隆抗体、各种检测试剂盒、PCR引物，可通过国内外有关生物公司购买和国外有关科研合作单位赠送。
3、申请人简历（包括申请者和项目组主要成员的学历和研究工作简历，近期已发表与本项目有关的主要论著目录和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务。论著目录要求详细列出所有作者、论著题目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止页码等；奖励情况也须详细列出全部受奖人员、奖励名称等级、授奖年等。）
①吴秋玲，女 ，28岁，血液科主治医师，1999年6月毕业于华中科技大学同济医学院获临床医学硕士学位，在职医学博士，具有较丰富的临床和实验经验，熟练掌握细胞培养、分子生物学、基因工程等实验技术。1995年曾参与《糖尿病的流行病学研究》课题，是国家自然科学基金课题《调节急性白血病核孔蛋白新型抗肿瘤中药的筛选》（项目批准号30472267）的主要成员，目前正在承担该课题主要研究内容，2004年获华中科技大学同济医学院院内课题资助，课题名称《H2AX在恶性血液病耐药中的地位》。本课题负责人。发表文章：
1、吴秋玲，等 电针对切断坐骨神经大鼠足三里穴肥大细胞的影响 针刺研究 1996年 36（5）：47-49
2、吴秋玲，等 结核性和恶性胸腔积液中白细胞介素4和γ干扰素的变化 中华结核和呼吸杂志 2000 23（1）：120
3、吴秋玲，等 rhTPO治疗难治性特发性血小板减少性紫癜的临床研究 华中科技大学学报 2004 33（3）：297
4、何静，吴秋玲 rhTPO治疗急性白血病化疗后血小板减少的临床研究 临床血液学杂志 2004 17（4）：158
5、吴秋玲，等 姜黄素对Raji细胞α4β1整合素表达及迁移的影响 临床血液学杂志 已接受
②姚军霞，女，30岁，主治医师， 2002年获华中科技大学同济医学院附属协和医院内科血液病学博士。博士毕业论文为《人巨细胞病毒体外感染人巨核细胞及其反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究》。2002年始在协和医院干细胞研究中心工作，主要从事干细胞的研究。掌握细胞培养、造血干细胞分析、分选等实验技术。熟悉激光共聚焦显微镜、遗传工作站、动物模型等平台的基本研究方法和应用。正在参与国家973重点课题子项目《人胚胎生殖脊干细胞的分化与组织干细胞的可塑性研究》中《维持胚胎干细胞不分化分子机理》课题和国家自然基金杰出青年基金课题《白血病干细胞鉴别、基本特征和临床意义》（项目批准号No.30225038）的研究工作。在本课题研究中负责急性白血病干细胞的分选及培养。近期发表文章：
1） Junxia Yao,et al. Respiratory syncytial virus bronchiolitis ininfants is associated with predominant Th2-like response.Peadatric Research.1999,49（5）：758（SCI收录杂志）
2） 姚军霞，吴健民.呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿IFN-γ/IL-4水平变化及意义.上海免疫学杂志.2001，21：49-52
3） 姚军霞，宋善俊等.人巨细胞病毒对人巨核系祖细胞体外生长的影响.临床血液学杂志.2002，15：69-72
4） 姚军霞，宋善俊等.人巨细胞病毒感染巨核系祖细胞及反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究.中华血液学杂志.2004，25：720-723
5）Yao Junxia, Song Shanjun, Hu Lihua. The effect of human cytomegalovirus on the formation of CFU-MK in vitro. Journal of Huazhong Science and Technology University（Medical Science），2004，24：134-137
③杨玲 主治医师，医学博士，博士后在站。1994年毕业于泸州医学院， 1997年毕业并获硕士学位,毕业后于湖北中医学院附属医院肝病研究所，从事中医药防治慢性肝病的科研与临床工作，1998年在北京医科大学学习分子生物学技术。2002年博士毕业并获博士学位，博士毕业后在华中科技大学同济医学院协和医院消化内科从事博士后研究。1997年开始先后参加了国家中医药管理局资助的“中医不同治则对HBV前C区基因变异的影响”(95B059) 、国家自然科学基金资助“丙型肝炎裸鼠模型的建立及对中药筛选的价值”（39670910）、湖北省教育厅资助“抗纤软肝冲剂抗大鼠肝纤维化的作用及机理研究”、湖北省自然科学基金资助“抗纤软肝冲剂影响肝星状细胞增殖的信号机制”（2000J042）、湖北省卫生厅资助的“莪术对日本血吸虫病大鼠肝星状细胞收缩及门脉高压的调节作用”等课题的研究工作。
目前承担在研科研课题有：
1. 莪术提取物调控Rho信号途径对肝星状细胞活化的影响（2004035198），项目负责人，中国博士后科学基金资助。
2. 肝病血瘀证的分子辨证机理研究（04-05JP42），项目第二负责人，国家中医药管理局资助。
3. 非酒精性脂肪肝与瘦素调节及中药干预的实验研究，项目负责人，院内课题。
科研获奖：
1. 中医证型及多法联用与慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变的相关性研究（成果编号EK020622），2004年获湖北省科技进步三等奖，排名第二。
2. 抗纤软肝颗粒影响肝星状细胞增殖的跨膜信号机制，2003年获湖北省科技进步三等奖，排名第二。
3. 抗纤软肝冲剂抗大鼠肝纤维化的作用及机理研究，2001年获湖北省科技进步三等奖（成果编号EK010224），排名第三。
论著：
1 杨玲，程红求，张赤志. 抗纤软肝颗粒对PDGF诱导的HSC细胞周期及胞内Ca2+浓度的影响.中西医结合肝病杂志 2002.10(1):23
2 杨玲，朱清静，张赤志. 抗纤软肝冲剂对肝星状细胞表达TGF-β1mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的影响.中国中医基础医学杂志 2001.8:14
3 Yang L, Zhang CZ, Zhu QJ. Kangxian ruangan keli inhibits hepatic stellate cell proliferation mediated by PDGF. World J Gastroenterol 2003；9(9):1530-1553
4 杨玲，朱清静，张赤志，明安萍.抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响.中医杂志，2004；45（1）：55-58
5 杨玲，朱清静，笪邦红，张赤志.中药抗纤软肝颗粒抑制PDGF诱导的肝星状细胞MEK-1、c-fos表达.世界华人消化杂志，2004，12（2）：347-350
6 杨玲，杜修明，聂广.中药防治实验性肝纤维化研究概况.中医研究，1997，10（1）：46
7 程红球，张赤志，杨玲，朱清静.PDGF受体酪氨酸激酶介导的细胞信号传导在HSC 增殖中的作用. 中西医结合肝病杂志，2002，12（1）：63-64
8 朱清静，杨玲，盛国光，等. 慢性乙型肝炎病毒前C区基因突变与TNF-α的关系.世界华人消化杂志 1999.7(6):540
9 Zhu Qingjing, Yang Ling, Sheng Guoguang. Relationship of precore mutation in patients with chronic hepatitis B to the syndromes type of TCM. Journal of Gastroenterology and Hepatology,1999(suppl):327
10 唐智敏，杨玲，金文银，等.原代培养大鼠肝细胞分离方法比较研究.中西医结合肝病杂志，1999，9（4）：19
11 杨玲，盛国光，李翰旻，等. 慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变与中医虚实证的关系.中西医结合肝病杂志 1998.8(3):23
12 朱清静，杨玲，盛国光. 慢性乙型肝炎病毒前C区基因突变与中医证型的关系.中国中西医结合脾胃杂志 1999.7(2):87
13 朱清静，杨玲，盛国光，等. 52例慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变研究.临床肝胆病杂志 2000.16(1):28
14杨玲，朱清静，盛国光，李汉旻.慢性乙型肝炎病毒前C区基因突变与sIL-2R的关系.中西医结合肝病杂志 2001.11(3):10
4、承担科研项目情况（申请者和项目组主要成员正在承担的科研项目情况，包括自然科学基金的项目，要注明项目的名称和编号、经费来源、起止年月、负责的内容等。）
（1）吴秋玲 目前承担在研科研课题有：
①国家自然科学基金课题《调节急性白血病核孔蛋白新型抗肿瘤中药的筛选》（项目批准号30472267，2005年-2007年），课题组主要成员，负责分子生物学和免疫学技术
②华中科技大学同济医学院院内课题《H2AX在恶性血液病耐药中的地位》，为项目负责人。
（2）姚军霞 目前承担在研科研课题有国家973重点课题子项目《人胚胎生殖脊干细胞的分化与组织干细胞的可塑性研究》中《维持胚胎干细胞不分化分子机理》课题和国家自然基金杰出青年基金课题《白血病干细胞鉴别、基本特征和临床意义》（项目批准号No.30225038）。负责急性白血病干细胞的分选及培养。
（3）杨玲 目前承担在研科研课题有：
①《莪术提取物调控Rho信号途径对肝星状细胞活化的影响》（2004035198，2004年-2006年），中国博士后科学基金资助，项目负责人。
②《肝病血瘀证的分子辨证机理研究》（04-05JP42，2004年-2006年），国家中医药管理局资助，项目第二负责人，负责分子生物学研究。
③《非酒精性脂肪肝与瘦素调节及中药干预的实验研究》，华中科技大学同济医学院院内课题，项目负责人。
5、完成自然科学基金项目情况（对申请者负责的前一个已结题科学基金项目（项目名称及批准号）完成情况、后续研究进展及与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目研究工作总结摘要（限500字）和相关成果的详细目录。）
无
（三）经费申请说明（要求按照《国家自然科学基金经费管理办法》认真填写，购置5万元以上固定资产及设备等，须逐项说明与项目研究的直接相关性及必要性。）
无
（四）其他附件清单（附件材料复印后随纸质《申请书》一并上交）
（随纸质申请书一同报送的附件清单，如：具有中级技术职称申请者的推荐信或在职研究生申请项目的导师推荐信等。在导师的推荐信中，需要说明申请课题与学位论文的关系，承担课题后的工作时间和条件保证等。）
具有中级技术职称申请者的推荐信
签字和盖章页(此页自动生成,打印后签字盖章)
申 请 者：吴秋玲 依托单位：华中科技大学
项目名称：急性白血病干细胞横向分化为肝癌干细胞中Hiwi信号的功能及白桦脂酸的调节作用
资助类别：面上项目 亚类说明：青年科学基金项目
附注说明：
申请者承诺：
我保证申请书内容的真实性。如果获得基金资助，我将履行项目负责人职责，严格遵守国家自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，认真开展工作，按时报送有关材料。若填报失实和违反规定，本人将承担全部责任。
签字：
项目组主要成员承诺：
我保证有关申报内容的真实性。如果获得基金资助，我将严格遵守国家自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，加强合作、信息资源共享，认真开展工作，及时向项目负责人报送有关材料。若个人信息失实、执行项目中违反规定，本人将承担相关责任。
编号
姓 名
工作单位名称
项目分工
每年工作时间(月)
签 字
1
姚军霞
华中科技大学
分子生物学技术
7
2
杨玲
华中科技大学
分子生物学技术
7
3
张纯
华中科技大学
免疫学技术
7
4
刘芳
华中科技大学
流式细胞仪技术
7
5
何静
华中科技大学
细胞培养技术
7
6
刘红利
华中科技大学
细胞培养技术
7
7
陈卫华
华中科技大学
免疫学技术
7
8
舒文秀
华中科技大学
细胞培养技术
7
9
依托单位及合作单位承诺：
已按填报说明对申请人的资格和申请书内容进行了审核。申请项目如获资助，我单位保证对研究计划实施所需要的人力、物力和工作时间等条件给予保障，严格遵守国家自然科学基金委员会有关规定，督促项目负责人和项目组成员以及本单位项目管理部门按照国家自然科学基金委员会的规定及时报送有关材料。
依托单位公章 合作单位公章1 合作单位公章2
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lcllib (2007-2-04 19:42:37)